新疆枣果黑斑病病原菌断定及生物学特性,新疆枣果黑斑病病原菌断定及生物学特性

  内容提示：种子科技7 2022 年 17 期D01 ：i.cnl4-1160/s.2022.17.010月季黑斑病病原菌断定及生物学特性研讨陈雪莉(青岛市市级公园办理服务中心青岛市海泊河公园 ， 山东青岛 266000 )摘要:为科学防治月季在公园等环境下呈现的黑斑病 ， 以青岛市海泊河公园的月季植株为例 ， 收集患有黑斑病的植 株叶片作为实验原资料 ， 经过单胞别离法完结月季叶片与黑斑病病原体别离 ， 运用形状学断定法与人工接种 法对病原体进行形状学断定和致病性测定 ， 并对其 EFl-a 、 rDNA ITS 以及 GPD 等基因序列进行扩增与测 序 。 由辨别断定的成果可知 ， 月季黑斑病病原胞子...

  种子科技7 2022 年 17 期D01 ： 10.19904/j.cnki.cnl4-1160/s.2022.17.010月季黑斑病病原菌断定及生物学特性研讨陈雪莉(青岛市市级公园办理服务中心青岛市海泊河公园 ， 山东青岛 266000 )摘要:为科学防治月季在公园等环境下呈现的黑斑病 ， 以青岛市海泊河公园的月季植株为例 ， 收集患有黑斑病的植 株叶片作为实验原资料 ， 经过单胞别离法完结月季叶片与黑斑病病原体别离 ， 运用形状学断定法与人工接种 法对病原体进行形状学断定和致病性测定 ， 并对其 EFl-a 、 rDNA ITS 以及 GPD 等基因序列进行扩增与测 序 。 由辨别断定的成果可知 ， 月季黑斑病病原胞子形状为棕褐色棒状 ， 且胞子表面具有横纵方向的隔阂 ； 由多基因系 统进化成果证明 ， 导致该月季呈现黑斑病的病原为链格胞 。 经生物学研讨成果可知 ,289 、 pH 值为 6.0 且全 天光照的条件为病原菌丝的最适成长环境 。关键词 ： 月季;黑斑病;生物学特性文章编号: 1005-2690(2022 )17-0028-04 我国图书分类号: S436.8 文献标志码: B从已把握的月季病虫害品种的危害性视点来看 ， 黑斑病对月季健康情况影响最严峻 ， 而且发病率很高, 在我国多地月季栽培区域均有呈现旧 。 2021 年在青岛市 海泊河公园的月季绿化带中发现多株月季患有黑斑 病 。 为此 ， 文章以该区域的患病月季植株为实验目标, 以别离纯化的办法从形状与分子方面临黑斑病病原菌 品种与生物学特性进行查验确认剖析 ， 以期为相关防控单 位或科研人员供给协助 。1 资料与办法1.1 资料患病植株选取 。 以青岛市海泊河公园月季绿化带 下患黑斑病月季植株(整株)为研讨资料 ， 在实验内截 取患病叶片作为别离与对照资料 。试剂和培育基 。 测定试剂选用赛默飞公司的 DL DNA Marker, 博奥龙 2 x Taq PCR Mixture (含上样染 料 ) 、 Loading buffer, 引物见表 1 所示 。表 1 实验组成引物序列称号 序列ITS ］ 引物ITS4 引物GPD1 引物GPD2 引物EF1-728 引物EF1-986R 引物5 - TGCGTAGGTGAACGTGCGG-35 - TCCTCCGCTTATTGATATGC - 35 , -CAACGGCTTCGGTCGCATTG-3 ,5 一 GCCAAGCAGTTGGTTGTGC 一 35 一 CATCGAGAAGTTCGAGAAGG- 3*5 1 - TACTTGAAGGAACCCTTACC - 3 注 ： 引物的组成与 DNA 测序皆由某生物工程研讨所完结实验运用马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) 培育基 ， 制造 办法如下 。 选取洁净且水煮后的马铃薯 200 g (滤液) 、 葡萄糖与琼脂各 20 g, 将琼脂与马铃薯滤液充沛搅 拌 ， 待琼脂彻底容积后向其间参加称取好的葡萄糖 ， 将 冷却后的蒸憾水 (1 L ) 参加其间并将培育液的 pH 值调 节为 7.0, 最终将培育液包好放于灭菌锅中灭菌 ， 灭菌 完结后取出冷却备用 。1.2 办法1.2.1 病原菌别离月季叶片与黑斑病菌丝选用单抱别离法别离 。 首 先 ， 选择整株月季患病植株中有着十分显着黑斑病的患病 叶片送至实验室 ， 在黑斑病斑驳与叶片的交界处选取 9 mm X 9 mm 的安排块 ， 将其浸泡在浓度为 75% 的乙 醇溶液中消毒 ， 浸泡 30 s 后取出 ， 用无菌水漂洗 ， 共漂 洗 3 次 。 其次 ， 将其浸泡在浓度为 2% 的次氯酸钠溶液 中 ， 浸泡时刻为 60 s, 浸泡完结后再次用无菌水浸洗 ， 共浸洗 3 次 。 再次,将其放置在灭菌滤纸上转移至无菌 室晒干 ， 晒干后将其移放至环境和温度为 28 弋恒温环境 下的 PDA 培育基上进行培育 。 选用第三次清洗液制造 涂布平板并将其作为阴性对照 ， 培育 4 ~ 5 d 后调查黑 斑病菌菌落成长情况 ， 取菌丝顶级抱子放置于新的 PDA 培育基中进行培育(培育环境为 28 乜 ) ， 不断重复 上述操作直到别离出纯化菌株 。1.2.2 黑斑病病原菌的形状学断定开端调查纯化菌株培育基下的菌落疏密程度和颜 色等菌落特征 , 将其放置在光学显微镜下进行镜检 , 重 点调查对黑斑病病原菌菌丝和分生抱子的特征 ， 例如 分生抱子的形状 、 巨细 、 残损程度 、 抱子梗以及抱子有 无隔阂等信息 。1.2.3 黑斑病病原菌的分子生物学断定运用 CTAB 法对月季黑斑病病原菌的 DNA 进行 提取,实际操作过程如下 。 首要,需要在实验开端前将 2 - 丙醇 (CsHgO) 放置在 -20 t 环境下预冷 ， 将浓度为 70% 的乙醇放置在 4 七环境下进行恒温处理 ， 将实验 运用的水浴锅加热至 57 C 。 用无菌枪头刮取 0.1 mL 作者简介 ： 陈雪莉 (1976 ), 女 ， 汉族 ， 山东青岛人 ， 专科 ， 高级技工 ， 研讨方向为公园园林绿化办理及病虫害防治 。 28